La capacità di analisi in singola cellula, le caratteristiche di multidimensionalità (fino a 20 parametri analizzati simultaneamente = analisi policromatica) e la velocità di analisi (> 10.000 cellule/secondo) conferiscono alla citometria a flusso proprietà uniche per la capacità di interrogare rapidamente profili biologici multipli (proteine, epitopi, acidi nucleici, concentrazione di ioni, high content) in singola cellula, in un numero molto elevato di cellule (high throughput). Il “deep profiling” in singola cellula attraverso la diversità dei sottotipi cellulari è complementare alle tecnologie “omiche” ed è particolarmente importante per la comprensione della complessità delle funzioni biologiche cellulari, quali ad esempio le reti di trasduzione del segnale intracellulare, e dei meccanismi di differenziamento.
La piattaforma di citofluorimetria si avvale anche di strumentazione che monitora la bioenergetica di cellule vive, in tempo reale, in piastra da 24 wells. Le due vie principali per la produzione di energia, la respirazione mitocondriale e la glicolisi, comportano, rispettivamente, il consumo cellulare di ossigeno (OCR) e l’efflusso di protoni (ECAR). La tecnologia Seahorse XF utilizza sensori per rilevare le variazioni extracellulari di questi analiti e misurare i tassi di respirazione cellulare, glicolisi e produzione di ATP.
I nostri strumenti:
- Becton Dickinson LSRFortessa X-20. Citometro a flusso da banco dotato di tre laser (488nm‐blu, 640nm‐rosso e 405 nm), con la possibilità di essere equipaggiato con 5 laser, per l’acquisizione contemporanea di 14 parametri di fluorescenza, oltre a 2 parametri fisici (analisi policromatica). Dotato di sistema di acquisizione automatica per la lettura di piastre a 96-384 pozzetti per analisi high-throughput.
- Becton Dickinson FACSAria Fusion. Separatore cellulare ad alte prestazioni, dotato di cinque laser (488nm, 561nm, 640nm, 405 nm e 355 nm), permette l’analisi simultanea di 18 parametri (16 di fluorescenza e 2 fisici). È utilizzato per separare fisicamente fino a 4 diverse popolazioni cellulari simultaneamente, sulla base di analisi fenotipiche e/o funzionali multidimensionali. Le popolazioni cellulari separate (con purezza fino al 100%) sono vitali e possono essere coltivate e/o utilizzate per successive analisi genomico-funzionali.
- Analizzatore Seahorse XFe-24 (Agilent). Strumento che consente di analizzare in tempo reale e in “live” l’attività metabolica di cellule vitali tramite l’analisi delle principali vie metaboliche, la respirazione mitocondriale (consumo di ossigeno, OCR) e la glicolisi (acidificazione. ECAR), per fornire misure cinetiche funzionali della bioenergetica cellulare. In aggiunta a queste analisi cruciali per lo studio della risposta cellulare a stimoli o per la caratterizzazione di modelli cellulari in 2D o 3D (come gli organoidi), lo strumento Seahorse permette anche di personalizzare i saggi per comprendere in maniera più approfondita specifiche vie metaboliche, tramite l’utilizzo di kit dedicati. La potenzialità del Seahorse è ampia e soprattutto in grado di fornire risultati funzionali in piena sinergia con altre tecnologie già esistenti presso il Centro Piattaforme Tecnologiche dell’Ateneo di Verona. Lo spettro di applicazione del Seahorse permette di studiare diversi parametri bioenergetici in modelli cellulari di molteplici patologie approfondendo processi cellulari critici, tra cui l’attivazione metabolica, la proliferazione, la differenziazione, la morte cellulare e l’omeostasi cellulare.
Per prenotazioni e informazioni si veda la pagina Come funziona.
Altre informazioni sono presenti ai seguenti link:
Configurazione BD-FACSAria Fusion
Configurazione BD-LSR-Fortessa X20
Referente: Giulia Finotti (045 8027212)